Vortexing ne cisaillera pas votre ARN pour le rendre inutilisable si vous effectuez une RT d'amorçage aléatoire - uniquement si vous souhaitez cloner un long ARNm. Le support technique Invitrogen est également correct. Le chloroforme est plus lourd que le trizol et coulera au fond du tube.
Est-il sûr de vortexer l'ARN ?
Ne pas vortexer les lysats de Trizol ou les échantillons d'ARN pour éviter le cisaillement. Après l'extraction, gardez les échantillons d'ARN sur la glace en tout temps. Ce protocole est conçu pour des échantillons lysés de 1 ml de Trizol dans un tube de 1,5 ou 2 ml.
Pouvez-vous chauffer l'ARN ?
Par conséquent, évitez les températures élevées ( supérieures à +65 °C) car elles affectent l'intégrité de l'ARN. Au lieu de cela, pour faire fondre les structures secondaires, chauffez l'ARN à +65 °C pendant 15 minutes en présence de tampons dénaturants.
Comment remettre en suspension des pastilles d'ARN ?
remettez en suspension votre pastille avec de l'eau tiède (40-50 deg. celc). incuber à 45 degrés celc pendant 10 minutes. mettez-les en +4 pendant 4-6 heures.
Comment précipite-t-on l'ARN ?
A.
Une fois la concentration en sel ajustée, l'ARN peut être précipité en ajoutant 2,5 volumes d'éthanol ou 1 volume d'isopropanol et en mélangeant soigneusement, suivi d'un refroidissement d'au moins 15 minutes à -20°C.
