Lignes directrices pour la décongélation des cellules
- Décongeler les cellules congelées rapidement (< 1 minute) dans un bain-marie à 37°C.
- Diluer lentement les cellules décongelées avant de les incuber, en utilisant un milieu de croissance préchauffé.
- Plaque de cellules décongelées à haute densité pour optimiser la récupération.
- Utilisez toujours une technique aseptique appropriée et travaillez sous une hotte à flux laminaire.
Pourquoi décongeler les cellules ?
Il est essentiel de décongeler correctement les cellules afin de maintenir la viabilité de la culture et de permettre à la culture de récupérer plus rapidement. Certains cryoprotecteurs, comme le DMSO, sont toxiques au-dessus de 4 °C. Par conséquent, il est essentiel que les cultures soient décongelées rapidement et diluées dans un milieu de culture pour minimiser les effets toxiques.
Quel est le processus de décongélation ?
La décongélation est le processus consistant à amener un produit congelé à une température (généralement supérieure à 0 °C) où il n'y a pas de glace résiduelle, c'est-à-dire la "décongélation". La décongélation est souvent considérée comme une simple inversion du processus de congélation.
Quelle est la meilleure façon de geler des cellules ?
Congelez les cellules lentement en réduisant la température d'environ 1 °C par minute à l'aide d'un cryo-congélateur à débit contrôlé ou d'un récipient de cryo-congélation tel que Mr. Frosty », disponible auprès du matériel de laboratoire Thermo Scientific Nalgene (Nalge Nunc). Utilisez toujours le milieu de congélation recommandé.
Comment décongeler une cellule primaire ?
Essuyez l'extérieur du flacon de cellules avec de l'éthanol ou de l'isopropanol à 70 %. Dans une enceinte de sécurité biologique, tournez le bouchon d'un quart de tour pour relâcher la pression interne, puis resserrez. Décongelez rapidement les cellules dans un bain-marie à 37 °C en agitant doucement le flacon. Retirez le flacon lorsqu'il reste une petite quantité de glace.
