Si votre protéine n'est pas de la même taille que votre anticorps, vous pouvez éluer avec 0.1M glycine, pH2-3 puis séparer la protéine d'intérêt de l'anticorps en utilisant SEC (comme superdex 200).
Qu'est-ce que l'élution d'une protéine ?
Les protéines sont éluées par un gradient de quantités croissantes d'un solvant organique, tel que l'acétonitrile. Les protéines éluent en fonction de leur hydrophobicité. Après purification par HPLC, la protéine se trouve dans une solution qui ne contient que des composés volatils et peut facilement être lyophilisée.
Pourquoi les protéines ont-elles un faible pH d'élution ?
L'utilisation d'un tampon à faible pH pour l'élution de la protéine A est connue pour contribuer à l'agrégation du produit Pourtant, un ensemble plus limité de preuves suggère qu'un pH faible n'est peut-être pas le seul cause de l'agrégation dans la chromatographie de la protéine A, d'autres facettes du processus peuvent plutôt y contribuer de manière significative.
Comment se fait l'élution ?
En chimie analytique et organique, l'élution est le processus d' extraction d'un matériau d'un autre par lavage avec un solvant; comme dans le lavage des résines échangeuses d'ions chargées pour éliminer les ions capturés. … Une fois que les molécules de solvant ont déplacé l'analyte, l'analyte peut être retiré de la colonne pour analyse.
De combien d'anticorps avez-vous besoin pour Coip ?
Pour les expériences Co-IP de routine, l'anticorps que j'ai utilisé est pas plus de 2ug (Dans mon ensemble, 1,4 -2,0ug d'anticorps est suffisant pour capturer 2500-5000ug de lysat de protéines.) Mais cela dépend toujours des niveaux d'expression de vos protéines cibles dans vos échantillons, vous devrez donc probablement faire quelques modifications.
How Much Protein Do You Need? Explained by Dr. Berg
