Ce qui suit est un aperçu des différentes étapes d'un protocole de coloration par immunofluorescence indirecte
- Planification d'expériences et préparation d'échantillons. …
- Fixation de l'échantillon. …
- Perméabilisation cellulaire. …
- Blocage. …
- Incubation des anticorps primaires. …
- Incubation d'anticorps secondaire. …
- Contre-teinture et Montage.
Comment réalisez-vous l'immunofluorescence ?
Toutes les étapes d'incubation ont lieu à température ambiante
- Laver les cellules deux fois et utiliser une pince à épiler pour placer soigneusement la lamelle avec les cellules retournées dans la chambre humidifiée.
- Fixer avec 4 % de formaldéhyde pendant 10 minutes et laver 3 ×.
- Perméabiliser avec 0,1 % TX-100/PBS pendant 15 à 20 minutes et laver 3 ×.
Comment utilise-t-on l'immunofluorescence dans une cellule ?
Protocole d'immunofluorescence pour cellules adhérentes
- Seed 1–1.5 x104 cellules par puits d'une lame à 4 chambres dans 500 ml de milieu de culture. Incuber à 37 °C à 5 % de CO2.
- 32–36 heures après l'ensemencement des cellules, retirez le milieu de culture cellulaire et rincez les cellules 3 fois avec 500 µL de PBS 1X.
Qu'est-ce qu'un exemple d'immunofluorescence ?
Par exemple, un chercheur peut créer anticorps primaires chez une chèvre qui reconnaissent plusieurs antigènes, puis utiliser des anticorps secondaires de lapin couplés à un colorant qui reconnaissent la région constante des anticorps de chèvre ( anticorps anti-chèvre de lapin).
À quoi sert la coloration par immunofluorescence ?
La coloration par immunofluorescence (IF) est une technique largement utilisée dans la recherche biologique et le diagnostic clinique L'IF utilise des anticorps marqués par fluorescence afin de détecter des antigènes cibles spécifiques. Suivie par l'imagerie, c'est une technique très directe car vous pouvez réellement voir quelque chose.
