Pour réduire la liaison des anticorps non spécifiques et, par conséquent, réduire le signal de fond, il est recommandé d' utiliser une solution de blocage avant l'incubation avec les anticorps La solution de blocage la plus efficace sera être celui contenant du sérum de la même espèce dans laquelle l'anticorps secondaire a été produit.
Comment éviter les taches de fond ?
Diminuer l'épaisseur des coupes de tissus peut aider à réduire les taches de fond. Essayez de couper des sections plus fines pour un IHC plus propre. Il est également important de veiller à ne pas laisser sécher les sections, car le séchage peut entraîner une forte coloration non spécifique.
Comment optimiser l'immunofluorescence ?
Microscopie par immunofluorescence: 10 conseils techniques pour réussir
- Fixation cellulaire et perméabilisation. …
- Spécificité des anticorps. …
- Utiliser la dilution d'anticorps appropriée. …
- Optimisation des tampons et des agents de blocage. …
- Utilisation d'une densité cellulaire appropriée. …
- Multiple coloration. …
- Anticorps secondaires. …
- Réduction de l'arrière-plan.
Qu'est-ce qui cause la coloration du fond ?
La coloration de fond peut être causée par une liaison inappropriée des anticorps ou par des erreurs lors de la préparation de la lame de tissu.
Les anticorps secondaires réduisent-ils les signaux de fond ?
Les anticorps secondaires spécifiques de F(ab) peuvent aider à réduire le signal de fond en éliminant la liaison non spécifique de les protéines IgG trouvées dans les tissus par l'anticorps secondaire.
